冻卵,即利用细胞深低温冷冻保存技术,将卵子采用特殊的保护剂和降温措施放置在的液氮中冷冻。冷冻使其代谢停止或者减弱到足够小的程度,但又不失去升温后恢复代谢的能力,从而能长期保存生物材料的一种技术。-196 ℃(液氮)是 佳冷冻保存温度。
怎么冻卵?
玻璃化冷冻法( Vitrification )
定义及方法
“玻璃化”是指当水或溶液快速降温达到或低于 -100 ~ -110 ℃的温度范围时,形成一种具有高黏度的介于液态和固态之间的、非晶体态的、杂乱无章的、透明的玻璃状态。
在玻璃化过程中,分子不重新排列,不发生剧烈运动,没有准确、固定的转变固化点。
当水溶液含有电解质或其他可溶性成分转变成玻璃态时,由于其均一的分散系统未遭到破坏,所以溶液的浓度不发生改变或改变很小。
玻璃化冷冻法的基本原理是将高浓度的冷冻保护剂在超低温环境下凝固,形成不规则的玻璃化样固体,保存了液态时正常分子和离子分布,因而在细胞内发生玻璃化时能起到保护作用。
所保存细胞在冷冻保护液中脱水到一定程度后,则引起内源性胞质大分子如蛋白质及渗透到胞内的冷冻保护剂浓缩,从而使细胞在剧烈的快速降温中得到保护。
玻璃化冷冻技术的特色就是使细胞本身及冷冻溶液在冷冻时,呈现黏稠而不产生结晶的玻璃化状态,利用这种不结冰的原理以改善慢速冷冻之缺点。
玻璃化冷冻过程中会受到诸多因素影响:冷冻保护剂的类型和浓度、玻璃化冷冻液的作用温度、细胞与投入液氮前与保护剂的接触时间、冷冻过程中的承载工具、细胞的发育阶段和质量等。